超分辨率显微镜

DNA-涂料成像

单分子定位显微镜纳米级地形中的点积累

探索DNA涂料解决方案

用于多路复用,多色DNA涂料成像的唯一开箱解决方案

结合Bruker的软件控制,自动化,全集成微流体单位, 这vutara vxl.超分辨率显微镜是唯一的商业系统提供开箱即用的多路复用DNA涂料功能。对这些工具进行,DNA-涂料成像允许单分子定位显微镜中的10nm定位精度无限制多路复用潜力

此外,具有Microfluidics系统的Vutara显微镜提供了增加的益处:

  • No-Hassle设置与专家服务和支持,以加快数据收集时betway手机客户端下载间
  • 结果比用改装系统收集的数据更可靠和可重复
  • 自动化和多条件/多用户编程,可容易可扩展实验设计

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联系我们以了解有关使用Vutara VXL显微镜进行DNA绘制实验的更多信息。

什么是DNA涂料?

什么是DNA涂料?

DNA-涂料是一种通过用荧光团标记的短(<10个核苷酸)寡核苷酸的结合能够使单分子定位能够与靶分子结合的互补寡核苷酸,通常是抗体。它允许广泛的成像模式,从整个单元广泛的Z堆叠到高分辨率多目标图像。

了解DNA涂料成像的优势

短寡核苷酸的结合本质上是瞬态的,因此产生闪烁的效果类似于Dstorm或Palm,但DNA涂料与其他闪烁技术具有许多优点。使用用于核酸纳米结构的DNA涂料成像的优点包括:
  • 更高的光子产量:闪烁通常比传统的大型大量更持久。这导致来自荧光团的更高的光子产量,因此与Dstorm和Palm的方法相比,允许更高的定位精度(<10nm)。
  • 几乎不可溶解的成像:样品在过量的荧光团中沐浴,允许极度持久的成像。
  • 无限制的多路复用潜力:由于靶特异性由核苷酸序列设定,因此可以 - 具有正确的工具 - 用不同的寡核苷酸序列标记多个靶标。利用vutara的集成微流体单元,可以从样品中洗涤给定靶的成像链,并加入标记不同的生物靶标的不同的成像链。

DNA-涂料如何工作?

DNA-涂料如何工作?

DNA-涂料通过含有荧光团的短“成像寡核苷酸”的瞬态结合作用于互补的寡核苷酸 - 被称为“对接链” - 在感兴趣的目标上,例如抗体,纳米曲面,适体或自杀酶配体。

使用具有DNA涂料的超分辨率显微镜

具有DNA-涂料的超分辨率成像涉及几个步骤,包括:

  1. 通过常规技术用“对接链”标记样品并准备成像。
  2. 对于成像,将样品沐浴在成像缓冲液中(通常是PBS,但可包括氧气清除剂)和与对接股线的成像寡聚物的低(通常为0.1〜1nm)的成像寡聚。成像寡核苷酸通常为9-10个核苷酸,并含有荧光团。由于其氟化性,我们推荐DNA涂料的CY3B,从而提高背景。
  3. 一旦进入成像缓冲区,就可以成像样本。成像股向对接链的瞬态结合停止了荧光团的扩散,使其在相机上成像。

由于样品在不断交换的成像股线上沐浴,因此目标基本上是不可溶解的,使得可以批量处理大量帧和延伸的Z堆叠。

上面的卡通显示DNA-涂料如何工作。用与对接链寡核苷酸标记的抗体标记靶蛋白(管蛋白)。然后将样品沐浴在成像链寡核苷酸中。荧光标记的成像链与对接链的瞬态结合导致样品似乎闪烁,然后可以在Vutara SRX软件中定位。重复该过程直到形成超分辨率图像。

为什么使用DNA涂料?

为什么使用DNA涂料用于3D蜂窝超分辨率成像?

BS-C-1细胞中微管蛋白网络的三维细胞骨架成像。用α-微管蛋白原发性抗体和抗兔寡核苷酸缀合的第二抗体标记细胞。左:3D管蛋白网络深度彩色。右:关闭显示中空标记腔的微管蛋白聚合物的视图。二次DNA-涂料抗体购自Massive-photonics.com

高精度定位

DNA-涂料允许SUB-10 NM定位精度,使其成为最精确的显微镜技术之一。

这里,利用具有水浸没1.2A的Vutara显微镜用于DNA涂料实验。该图像显示了标有与DNA-涂料二抗缀合的管蛋白抗体的整体BS-C-1细胞的管蛋白网络。插图显示了管蛋白网络的缩放部分。微管的内腔清晰可见。

多色不漂立的成像

使用DNA涂料使多路复用多色超分辨率成像是可能的。

由于样品在实际无限的荧光团供应中沐浴,DNA-涂料具有大型多色Z叠层的电位。这使得由数百万本地化组成的大规模Z堆叠成像。

这里,在Vutara单分子定位显微镜上进行双色DNA涂料实验。管蛋白在Magenta的青色和克拉仑标记。此外,由于DNA涂料的不可溶解性,可以是可以的DNA涂料的大Z叠层。

3D BS-C-1细胞微管蛋白网络和Clathrin笼的细胞骨架成像。用α-微管蛋白和抗clathrin重链初级抗体和抗兔和抗小鼠寡核缀合的二抗标记细胞。TOP:用α-微管蛋白(青色)和克拉纳笼(洋红色)标记的BS-C-1细胞。底部:与上面相同图像的电影显示数据的3D性质。二次DNA-涂料抗体购自Massive-photonics.com
左:DNA涂料的工作流程。每个靶(肌动蛋白,汤姆20,微管蛋白和克拉肽)用初级和二抗标记。二级抗体具有正交对接股线。通过在互补成像寡核苷酸中依次对每个靶序列地进行成像,然后在所需的目标中,然后在下一个成像链中流动的洗涤步骤进行下一个靶标。使用Vutara显微镜和SRX软件自动处理流体和成像。右:来自每个目标的图像在SRX软件中自动组合。二次DNA-涂料抗体购自Massive-photonics.com

无限制的多路复用潜力

DNA-涂料具有巨大的多路复用成像潜力。

这里,使用Vutara VXL和集成的流体单元进行多目标DNA涂料实验。在不同探针上使用正交对接股线,可能是可能无限数量的目标。

此外,如图所示是在Vutara单分子定位显微镜和集成流体单元上进行的四个目标DNA涂料实验。F-Actin-Magenta,Tom20-Cyan,小管蛋白 - 黄色和克拉仑 - 绿色。

样本图像

使用vutara vxl自动收集使用Fluidics的图像

样品图像:DNA涂料改善超分辨率成像

BS-C-1标有抗微管蛋白,肌动蛋白,抗汤姆20和抗克拉肽。正交2°DNA-涂料抗体购自massive-photonics.com.

左上角:肌动蛋白 - 洋红色,微管黄色,线粒体 - 橙色。


右上方:线粒体 - 青色,F-actin-magenta,小管蛋白黄色,克拉仑重链 - 绿色。
左下方:F-Actin-Cyan,Clathrin Cage-Green。
右下方:线粒体 - 青色,微管蛋白。