超分辨率显微镜

活细胞成像

粒子跟踪与细胞成像相结合

使用Vutara的活细胞单分子定位显微镜

生物成像需要观察细胞内的动态结构;观察细胞中单个生物分子(颗粒跟踪)或观察生物过程,如细胞膜、细胞器或细胞骨架运动。

Vutara VXL显微镜的功能是理想的活细胞单分子定位显微镜:

  • 使用专利双翼技术进行三维定位——每幅图像有1µm的三维数据——无需Z系列
  • 轴向范围可以通过Z系列扩展
  • 快速采集-高达800帧/秒全帧,高达3000帧/秒,ROI更小
  • 敏感探测器-冷却科学CMOS相机
量子点标记EGF受体的单粒子流线。
Alexa Fluor 647®标记转移的实时成像。顶部,沿细胞膜移动的转铁蛋白团的薄膜。底部,总结了用时间着色的图像。

粒子跟踪

Vutara VXL显微镜是专为单分子定位显微镜,因此是理想的粒子跟踪实验设计。Vutara固有的高速三维成像单个荧光团的能力使其成为粒子跟踪的理想工具。样品可以用有机染料、蛋白质或量子点标记,并使用Vutara VXL的高速灵敏相机成像。Vutara的SRX软件具有内置的粒子跟踪算法,用于在多个帧上跟踪荧光团。这是单分子定位显微镜相对于基于图像的超分辨率显微镜(如STED或SIM)的一个强大而独特的特性。SRX软件还包括一个全面的粒子跟踪统计软件包,用于分析您的数据。

在左边,我们可以看到单个EGF受体被量子点标记的扩散。

细胞成像

Vutara VXL显微镜设计用于单分子定位显微镜,能够在有意义的时间尺度上捕捉生物运动。这种独特的成像方式允许用户收集感兴趣的结构的动态超分辨率图像,同时也给用户提供了每个分子随着时间的精确三维位置。这突出了单分子定位显微镜独特的成像方式,并使其有别于基于图像的超分辨率技术。

在右边,我们看到两个实验监测活细胞中的线粒体动态。一个用橙色的HaloTag®染料(549)成像,另一个用光激活的远红染料(PA-JF-646®)标记。

结合粒子跟踪和细胞成像

Vutara VXL显微镜的能力,执行多色单分子成像允许一些独特的实验设计。左边显示的是表达tomm-20::HaloTag®的细胞的两种颜色实验。在这个实验中,tomm20::HaloTag®用高密度的JF549®和稀疏的PA-JF646®标记。这使得密集的染料被用作背景标记,允许随着时间的推移进行线粒体的重建和定位。而第二种染料可以跟踪线粒体内单个分子的扩散。使用这种技术,可以监测细胞膜中蛋白质的扩散如何随着线粒体的运输和发生融合或裂变而改变。

覆盖的活体线粒体和单粒子跟踪单一tomm20蛋白扩散在线粒体的流线。
单个tomm20蛋白的三个粒子轨迹。
tomm20扩散线叠加及线粒体结构图像。