超分辨率显微镜

DNA-PAINT成像

单分子定位显微镜在纳米尺度形貌中的点积累

探索DNA-PAINT解决方案

多重,多色dna -油漆成像的唯一开箱即用的解决方案

与布鲁克的软件控制,自动化,完全集成微流体装置,Vutara VXL超分辨率显微镜唯一的商业系统它提供了开箱即用的多路DNA-PAINT功能。在这些工具上进行,DNA-PAINT成像允许在单分子定位显微镜中达到10纳米以下的定位精度具有无限的多路复用潜力

此外,带有微流体系统的Vutara显微镜还具有以下优点:

  • 无需麻烦的设置与专家服务和支持,加快时间的数据收集betway手机客户端下载
  • 结果比用改良系统收集的数据更可靠和可重复
  • 自动化和多条件/多用户编程,便于可扩展的实验设计

了解更多关于DNA-PAINT解决方案

或联系我们了解更多关于使用Vutara VXL显微镜进行DNA-PAINT实验的信息。

DNA-PAINT是什么?

DNA-PAINT是什么?

DNA-PAINT是一种通过将短(<10个核苷酸)的荧光标记寡核苷酸与与目标分子(通常是抗体)结合的互补寡核苷酸结合来实现单分子定位的技术。它允许广泛的成像模式,从整个细胞广泛的z堆栈高分辨率多目标图像。

了解DNA-PAINT成像的优势

短寡聚体的结合在本质上是短暂的,因此产生了类似于dSTORM或PALM的闪烁效果,然而DNA-PAINT比其他闪烁技术有许多优势。DNA-PAINT成像用于核酸纳米结构的优点包括:
  • 更高的光子产生:这种闪烁的持续时间通常比传统的dSTORM更长。与dSTORM和PALM等方法相比,这使得荧光团产生更高的光子,因此可以实现更高的定位精度(<10 nm)。
  • 实际上unbleachable成像:样品浸泡在过量的荧光团中,允许极长时间的成像。
  • 无限多路复用潜力:由于靶标的特异性是由核苷酸序列决定的,因此,在正确的工具下,可以用不同的寡核苷酸序列标记多个靶标。利用Vutara集成的微流体单元,可以将给定目标的成像链从样品中清洗出来,并添加标记不同生物目标的不同成像链。

dna油漆是如何工作的?

dna油漆是如何工作的?

DNA-PAINT的工作原理是,在目标物(如抗体、纳米体、适配体或自杀酶配体)上,将含有荧光基团的短“成像寡核苷酸”与互补寡核苷酸(称为“对接链”)短暂结合。

使用dna涂料的超分辨率显微镜

DNA-PAINT超分辨率成像包括以下几个步骤:

  1. 通过常规技术将样品标记为“对接链”,并准备进行成像。
  2. 成像时,样品浸泡在成像缓冲液(通常是PBS,但可以包括氧气清除剂)和低浓度(通常0.1-1 nM)的成像寡聚物(与对接链互补)中。典型的成像寡聚物长度为9-10个核苷酸,包含一个荧光团。我们推荐Cy3B作为DNA-PAINT,因为它的荧光性和较低的背景。
  3. 一旦进入成像缓冲,样品就可以被成像。成像链与对接链的瞬态结合阻止了荧光团的扩散,使其能够在相机上成像。

由于样品浸泡在大量过量的不断交换的成像链中,目标基本上是不可漂白的,这使得批量处理大量帧和扩展的z堆栈成为可能。

上图展示了DNA-PAINT的工作原理。靶蛋白(微管蛋白)用用对接链寡聚体标记的抗体标记。然后将样品浸泡在成像链寡聚体中。荧光标记的成像链与对接链的瞬时结合导致样本出现闪烁,然后可以在Vutara SRX软件中定位。这个过程重复进行,直到形成超分辨率图像。

为什么使用DNA-PAINT ?

为什么使用dna涂料进行3D细胞超分辨率成像?

BS-C-1细胞微管蛋白网络的三维细胞骨架成像。用α微管蛋白一抗和抗兔寡聚偶联二抗标记细胞。左:按深度着色的三维微管网络。右图:微管蛋白聚合物的近距离图,显示中空的标记管腔。Secondary DNA-PAINT抗体购自Massive-Photonics.com

高精度定位

DNA-PAINT允许10纳米定位精度,使其成为最精确的显微镜技术之一。

在这里,利用Vutara显微镜和水浸1.2 NA目标进行DNA-PAINT实验。该图像显示了整个BS-C-1细胞的微管蛋白网络,微管蛋白抗体与DNA-PAINT二抗结合。插图显示了微管蛋白网络的放大部分。微管腔清晰可见。

多色Unbleachable成像

DNA-PAINT使多色超分辨率成像成为可能。

DNA-PAINT具有大规模多色z型叠片的潜力,因为样品浸泡在几乎无限供应的荧光团中。这支持由数百万个本地化组成的大规模z-stack成像。

这里,我们在Vutara单分子定位显微镜上进行了双色DNA-PAINT实验。微管蛋白用青色标记,网格蛋白用品红标记。此外,由于DNA-PAINT的不可漂白性质,大z栈是可能的。

BS-C-1细胞微管蛋白网络和网格蛋白笼的三维细胞骨架成像。用α微管蛋白和抗网格蛋白重链一抗和抗兔、抗鼠寡聚偶联二抗标记细胞。顶部:用微管蛋白(青色)和网格蛋白笼(洋红色)标记的BS-C-1细胞。下图:与上图相同的影片显示了数据的3D性质。Secondary DNA-PAINT抗体购自Massive-Photonics.com
左:DNA-PAINT工作流程。每个靶点(肌动蛋白,tom20,微管蛋白和网格蛋白)都用一抗和二抗标记。二抗具有正交对接链。每个目标的成像顺序是通过流动的互补成像oligo到所需的目标,然后在流动下一个成像链为下一个目标之前的洗涤步骤。Vutara显微镜和SRX软件可以自动处理流体和成像。右图:每个目标的图像在SRX软件中自动组合。Secondary DNA-PAINT抗体购自Massive-Photonics.com

无限多路复用潜力

DNA-PAINT在多路成像方面具有巨大的潜力。

在这里,使用Vutara VXL和集成流体单元进行了多靶点DNA-PAINT实验。在不同的探测器上使用正交的对接链,可能有无限数量的目标。

图中还展示了在Vutara单分子定位显微镜和集成流体单元上进行的四靶DNA-PAINT实验。肌动蛋白品红,tom20-青色,微管蛋白黄色和网格蛋白绿色。

样品图片

图像自动收集使用Vutara VXL与流体

样本图像:dna -油漆改进超分辨率成像

BS-C-1标记抗微管蛋白、肌动蛋白、抗tom20和抗网格蛋白。正交2ºDNA-PAINT抗体购自Massive-Photonics.com

左上:肌动蛋白洋红色,微管蛋白黄色,线粒体橙色。


右上:线粒体青色,f -肌动蛋白洋红,微管蛋白黄色,网格蛋白重链绿色。
左下:f -肌动蛋白青色,网格蛋白笼绿色。
右下:线粒体-青色,微管-洋红色。