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超分辨率显微镜

DNA-PAINT成像

单分子定位显微镜纳米级地形中的点积累

探索DNA-PAINT解决方案

唯一开箱即用的解决方案,多路,多色dna -涂料成像

结合Bruker的软件控制,自动化,完全集成微流体装置, 这Vutara VXL超分辨率显微镜唯一的商业系统提供开箱即用的多路dna -涂料功能。在这些工具上,DNA PAINT成像可以在单分子定位显微镜中实现不到10 nm的定位精度具有无限的多路复用潜力

此外,带有微流体系统的Vutara显微镜还具有以下额外优点:

  • 无麻烦的设置与专家服务和支持,以加快时间的数据收集betway手机客户端下载
  • 结果比用改装系统收集的数据更可靠和可重复
  • 自动化和多条件/多用户编程易于扩展的实验设计

了解有关DNA-Paint解决方案的更多信息

联系我们以了解有关使用Vutara VXL显微镜进行DNA绘制实验的更多信息。

什么是DNA涂料?

DNA-PAINT是什么?

DNA-PAINT是一种通过荧光团标记的短(<10个核苷酸)寡核苷酸与与目标分子(通常是抗体)结合的互补寡核苷酸结合,实现单分子定位的技术。它允许广泛的成像模式,从全细胞广泛的z堆栈到高分辨率的多目标图像。

了解DNA-PAINT成像的优势

短寡核苷酸的结合本质上是短暂的,因此会产生类似于dSTORM或PALM的闪烁效果,但DNA涂料与其他闪烁技术相比有许多优点。利用DNA-PAINT对核酸纳米结构进行成像的优点包括:
  • 更高的光子产生:闪烁通常比传统的大型大量更持久。这导致来自荧光团的更高的光子产量,因此与Dstorm和Palm的方法相比,允许更高的定位精度(<10nm)。
  • 几乎不可溶解的成像:样品被浸泡在过量的荧光团中,允许极其持久的成像。
  • 无限制的多路复用潜力:由于靶特异性由核苷酸序列设定,因此可以 - 具有正确的工具 - 用不同的寡核苷酸序列标记多个靶标。利用vutara的集成微流体单元,可以从样品中洗涤给定靶的成像链,并加入标记不同的生物靶标的不同的成像链。

dna涂料是如何工作的?

dna涂料是如何工作的?

DNA涂料的工作原理是将一个包含荧光团的短“成像寡核苷酸”与一个互补寡核苷酸(称为“对接链”)短暂结合在目标物上,如抗体、纳米体、适体或自杀酶配体。

使用dna涂料的超分辨率显微镜

DNA-PAINT超分辨率成像包括以下几个步骤:

  1. 通过常规技术对样品进行“对接链”标记,并准备成像。
  2. 对于成像,将样品沐浴在成像缓冲液中(通常是PBS,但可包括氧气清除剂)和与对接股线的成像寡聚物的低(通常为0.1〜1nm)的成像寡聚。成像寡核苷酸通常为9-10个核苷酸,并含有荧光团。由于其氟化性,我们推荐DNA涂料的CY3B,从而提高背景。
  3. 一旦进入成像缓冲区,就可以成像样本。成像股向对接链的瞬态结合停止了荧光团的扩散,使其在相机上成像。

由于样品在不断交换的成像股线上沐浴,因此目标基本上是不可溶解的,使得可以批量处理大量帧和延伸的Z堆叠。

上面的卡通显示DNA-涂料如何工作。用与对接链寡核苷酸标记的抗体标记靶蛋白(管蛋白)。然后将样品沐浴在成像链寡核苷酸中。荧光标记的成像链与对接链的瞬态结合导致样品似乎闪烁,然后可以在Vutara SRX软件中定位。重复该过程直到形成超分辨率图像。

为什么使用DNA涂料?

为什么使用DNA涂料用于3D蜂窝超分辨率成像?

高精度定位

DNA涂料允许10纳米的定位精度,使其成为最精确的显微镜技术之一。

这里,利用具有水浸没1.2A的Vutara显微镜用于DNA涂料实验。该图像显示了标有与DNA-涂料二抗缀合的管蛋白抗体的整体BS-C-1细胞的管蛋白网络。插图显示了管蛋白网络的缩放部分。微管的内腔清晰可见。

示例:BS-C-1用抗微管蛋白标记。二次DNA-涂料抗体购自massive-photonics.com.

多色Unbleachable成像

使用DNA涂料使多路复用多色超分辨率成像是可能的。

DNA-PAINT具有大规模多色z堆栈的潜力,因为样本沐浴在几乎无限供应的荧光团中。这使得由数百万个定位组成的大规模z-stack成像成为可能。

在Vutara单分子定位显微镜上进行了双色DNA-PAINT实验。微管蛋白用青色标记,网格蛋白用洋红色标记。此外,由于DNA-PAINT的不可漂白性质,大的z堆栈是可能的。

示例:BS-C-1标有抗微管蛋白和抗克拉肽。二次DNA涂料抗体购自massive-photonics.com.

无限制的多路复用潜力

DNA涂料具有巨大的多路复用成像潜力。

这里,使用Vutara VXL和集成的流体单元进行多目标DNA涂料实验。在不同探针上使用正交对接股线,可能是可能无限数量的目标。

此外,如图所示是在Vutara单分子定位显微镜和集成流体单元上进行的四个目标DNA涂料实验。F-Actin-Magenta,Tom20-Cyan,小管蛋白 - 黄色和克拉仑 - 绿色。

示例:BS-C-1标记抗微管蛋白,肌动蛋白,抗tom20和抗网格蛋白。正交2ºDNA涂料抗体购自massive-photonics.com.。图像是自动收集使用Vutara VXL与流体。

样本图像

图像自动收集使用Vutara VXL与流体

样品图像:DNA涂料改善超分辨率成像

BS-C-1标记抗微管蛋白,肌动蛋白,抗tom20和抗网格蛋白。正交2ºDNA涂料抗体购自massive-photonics.com.

左上角:肌动蛋白 - 洋红色,微管黄色,线粒体 - 橙色。


右上:线粒体-青色,f -肌动蛋白-品红,微管蛋白-黄色,网格蛋白重链-绿色。
左下方:F-Actin-Cyan,Clathrin Cage-Green。
右下方:线粒体 - 青色,微管蛋白。