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超分辨率显微镜

活细胞成像

粒子跟踪与细胞成像相结合

使用Vutara活细胞单分子定位显微镜

生物成像需要观察细胞内的动态结构;无论是可视化单个的生物分子在细胞(粒子跟踪)或观察生物过程,如膜,细胞器或细胞骨架运动。

Vutara VXL显微镜的功能是理想的活细胞单分子定位显微镜:

  • 采用专利的双平面技术进行三维定位——每幅图像都有1µm的三维数据——无需拍摄Z系列
  • 轴向范围可以扩展与Z系列
  • 快速采集-可达800帧全帧,3000帧,更小的ROI
  • 敏感探测器-冷却的科学CMOS相机
量子点标记EGF受体的单粒子流线。
Alexa Fluor 647®标记转移的实时成像。上图是转铁蛋白团沿着细胞膜运动的膜。底部,总结图像颜色的时间。

粒子跟踪

Vutara VXL显微镜是专为单分子定位显微镜设计的,因此是理想的设计为粒子跟踪实验。Vutara固有的高速和三维成像单个荧光团的能力使其成为粒子跟踪的理想工具。样品可以用有机染料、蛋白质或量子点标记,并使用Vutara VXL的高速敏感相机成像。Vutara的SRX软件内置的粒子跟踪算法跟踪荧光团在多个帧。这是单分子定位显微镜在基于图像的超分辨率显微镜(如STED或SIM)上的一个强大而独特的特点。SRX软件还包括一个全面的粒子跟踪统计软件包分析你的数据。

在左边,我们可以看到一个用量子点标记的EGF受体的扩散。

细胞成像

Vutara VXL显微镜是专为单分子定位显微镜和能够捕捉生物运动有意义的时间尺度。这种独特的成像方式允许用户收集感兴趣的结构的动态超分辨率图像,同时也为用户提供每个分子随时间的精确3D位置。这突出了单分子定位显微镜的独特成像方式,并使其有别于基于图像的超分辨率技术。

在右侧,我们看到两个实验在监测活细胞的线粒体动态。一个用橙色HaloTag®染料(549)成像,另一个用可光激活的远红染料(PA-JF-646®)标记。

结合粒子跟踪和细胞成像

Vutara VXL显微镜的能力,以执行多色单分子成像允许一些独特的实验设计。左边是表达tomm-20::HaloTag®细胞的两种颜色实验。在这个实验中,tomm20::HaloTag®被高密度的JF549®和非常稀疏的PA-JF646®标记。这允许高密度染料被用作背景标记,允许随着时间的推移重建和定位线粒体。而第二种染料则可以在线粒体的背景下追踪单个分子的扩散。使用这种技术可以监测蛋白质在膜上的扩散如何随着线粒体的运输和融合或裂变而变化。

线粒体活图像的叠加和线粒体中扩散的单个tomm20蛋白的单粒子追踪流线。
三个单独的tomm20蛋白的粒子轨迹。
tomm20扩散流线叠加及线粒体结构图像。