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关于
职业生涯
timsTOF Pro由PASEF提供动力

timsTOF职业

配备PASEF®技术的timsTOF Pro在扫描速度方面提供了革命性的改进,增强了特异性和高灵敏度

4D中的OMIC

TIMS增加了第四维度的分离

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突出了

timstof.

加速4D-OMICS

速度
采用并行累加串行分段(PASEF)技术可实现> 100hz的测序速度。
高吞吐量
极高的数据采集速度大大提高了生物实验的吞吐量。
深度
由于来自捕获的敏感性,可以识别更多的肽及其翻译后修改(PTMS)。
鲁棒性
独特的仪器设计与TIMS正交反射,可以在不清洗仪器的情况下进行数千个样品的常规操作。

特征

timsTOF Pro由PASEF提供动力

4D-Proteomics™的新标准 - 挖掘更深,更快地进入蛋白质组

基于质谱(MS)的蛋白质组学已经成为鉴定和定量成千上万蛋白质的强大技术。然而,由于目前质谱仪的速度、灵敏度和分辨率有限,对完整蛋白质组的覆盖仍然非常具有挑战性。

timsTOF Pro使用并行积累串行碎片(PASEF®)采集方法,提供极高的速度和灵敏度,以达到猎枪蛋白质组学和磷蛋白质组学的新深度,使用低样本量。

timsTOF Pro由PASEF提供动力

双重蒂姆

捕获的离子迁移光谱(TIM)首先是气相中的分离技术,除了HPLC和质谱外,还可以消解除了分离的额外尺寸的样本复杂度,增加了复合物表征的峰值容量和置信度。同样重要的是,TIMS装置还用于积聚和浓缩给定质量和移动性的离子,使得灵敏度和速度的独特增加以及分离的附加尺寸。

猎枪蛋白质组学实现接近100%的占空比
现在,双TIMS技术可以实现接近100%的高灵敏度、高速猎枪蛋白质组学。这种新颖的设计允许离子在前面部分的积累,而离子在后面部分的顺序释放取决于他们的离子迁移率。这个过程被称为并行积累串行碎片,或PASEF®。

并行积累串行碎片(PASEF®)。PASEF®策略在timsTOF Pro仪器中,离子积累,而第二个TIMS区域是连续洗脱肽物种。
timsTOF Pro由PASEF提供动力

优秀的硬件性能

第二代双蒂姆分析仪针对霰弹枪蛋白质组学的需求进行了优化。由于其独特的几何离子,从TIMS分析仪的第二部分释放到它们的迁移率,而进一步的进入离子可以在TIMS分析仪的第一部分中并行累积。利用平行累积技术,实现近100%的占空比,导致几乎没有离子损失。

在timsTOF Pro中,一个先进的分段四极质量滤波器用于高离子传输和隔离效率。四极杆质量位置与TIMS分析仪中特定离子的洗脱时间同步。由于其超高质量位置切换时间(< 1ms),使PASEF®方法具有最佳性能。

原理图的timsTOF Pro
timsTOF Pro由PASEF提供动力

PASEF®

平行积累序列片段(PASEF®)的循环时间:通过将四极子与TIMS洗脱时间同步,平均可以在100 ms的时间范围内分割12个前体。智能软件针对低水平前体多次进行PASEF®MS/MS碎片化。

凭借速度,Bruker专家重新设计了MS / MS技术,以满足霰弹枪蛋白质组学的要求。使用捕获的离子迁移光谱法分离肽离子,洗脱(〜100ms)并在QTOF中检测到,产生TIMS MS热图。在PaseF®方法中,相同的时间分离与四极其在洗脱期间隔离一定的离子物种,并立即移至下一个前体。父母和片段光谱由移动性值对齐。通过平行累积串行碎片(PaseF®)技术> 100 Hz测序速度可以实现。通过PaseF®方法通过选择几次,可以增加低丰富肽的MS / MS Spectra质量。

PASEF®:完美适合猎枪蛋白质组学
由PASEF®驱动的timsTOF Pro提供测序速度>100 Hz,而不丢失灵敏度或分辨率。这是通过同步四极隔离质量窗口与特定肽包从TIMS漏斗的洗脱时间来实现的。

好处

timsTOF Pro由PASEF提供动力

超强的健壮性,无需清洗

唯一具有PASEF®功能的质谱仪
Bruker在2016年推出了TIMS(捕获离子迁移光谱)技术,作为一项革命性的离子迁移技术,在一个非常紧凑的设备中实现了前所未有的离子迁移分辨率水平。第二代双TIMS分析仪现在实现了PASEF®(并行积累串行碎片),为猎枪蛋白质组学制定了不受影响的速度、灵敏度和分辨率的新标准。

超强的健壮性,无需清洗
许多用于散弹枪蛋白质组学的MS仪器在每天24小时运行时,需要每两周或每月清洗一次,而且即使在较短的时间内性能也会明显下降。timsTOF Pro的超强健壮性意味着该仪器可以在许多天或几周内24/7地运行,而不会显著损失灵敏度或其他性能指标。

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PaSER运行完成-动态不受损害的数据处理

timsTOF Pro允许在测序速度超过100 Hz的情况下,以最小的样本负载(<200 ng)分析数百个样本。所有这些都具有不受影响的蛋白质组深度。这改变了蛋白质组学的研究方式,但也带来了一个新的限制——数据分析。现代研究人员必须处理数百个样本的信息密集内容与timsTOF Pro。对于大多数管道,这将在数据分析步骤中造成瓶颈。Bruker通过引入实时数据库搜索功能PaSER(实时并行数据库搜索引擎)来创新这一步,它消除了数据分析的障碍。使用PaSER,只要LC-MS运行完成,结果就在手边或运行完成。

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深入第四维度

MaxQuant/Perseus和PEAKS Studio数据处理
开放式文件数据格式允许研究人员直接使用原始数据并使用行业领先的软件。MaxQuant已被用于管理空间中的4维(4D)特征,包括保留时间、离子迁移率、

质量和信号强度有利于肽、蛋白质和翻译后修饰的鉴定和定量。PEAKS Studio将从头测序与传统数据库搜索相结合,并对处理原始数据进行了优化。

应用程序

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重新定义蛋白质组学的吞吐量和敏感性

使用100 ng HeLa消化液进行短梯度(30分钟、60分钟和90分钟)的深层蛋白质组覆盖
转化为高蛋白质组覆盖率的速度和敏感性
The combined power of trapped ion mobility spectrometry (TIMS) and Parallel Accumulation Serial Fragmentation (PASEF®) allows for greater proteome or sub-proteome (e.g. phosphoproteome) coverage without requiring the large sample amounts (typically 1-4 µg of a peptide mixture on column) often used in proteomics.
在低于200 ng的样品负载下可以获得优异的结果,从而降低了样品制备成本和质谱维护频率。利用90分钟的梯度长度,可以从一个典型的人类细胞系裂解液中鉴定出5400多个蛋白质组。timsTOF Pro还可以从少量高度复杂的混合物中提供可重复的定量信息。

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最新timsTOF Pro应用笔记

prm-PASEF®:实现高通量,高灵敏度的靶向蛋白质组学
实现高通量、高灵敏度的蛋白质组学。prm-PASEF®获取方法是为了将并行积累序列片段(PASEF®)获取策略的优势应用于靶向蛋白质组学领域。

原代分泌胰岛素的胰腺β细胞的蛋白质组学询问
集成的离子迁移率与经线速度MS/MS在timsTOF Pro上的采集相结合,为深入的、分子水平的理解β细胞生理学和潜在的糖尿病新靶标通路铺平了道路。

高通量4d -蛋白质组学™- dia-PASEF®和Evosep One在短梯度的应用
timsTOF Pro提供了两种独特技术的组合,即由捕获离子迁移光谱(TIMS)提供的第四维度,以增强离子分离和灵敏度和并行积累串行碎片(PASEF®)
提高离子利用效率和数据采集速度。

网络研讨会

奖状

“我们现在知道,在二维(保留时间和m/z)分析肽混合物时,它们仍然非常复杂。原则上,再增加一个维度应该能让我们走得更远。除了额外的分离维度,timsTOF Pro还给我们提供了极高的速度和灵敏度,以更少的样品材料深入研究蛋白质组。”

Matthias Mann博士,德国max - planck生物化学研究所蛋白质组学与信号转导系主任

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