Guide de la microscopie Raman
Bases de la microscopie Raman
qu'est-ce que la Microscopie Raman？
à提议de la Microscopie Raman
La Microscopie Raman（μ-Raman）est la Combinaison de la Microscopie cultionnelle et d'une识别Chimique Chimique独特的PAR Spectroscopie Raman。
Les deux techniques sont assez puissantes à elles seules, mais lorsqu’elles sont combinées, elles offrent la possibilité d’examiner chimiquement les plus petits objets (> 0,5 μm) et donc, elles relient l'information spectrale à l’information spatiale.
Contrairement à la microscopie infrarouge, les microscopes Raman sont beaucoup plus faciles à appliquer parce qu’ils utilisent une lumière compatible avec une optique verre. Par conséquent, les microscopes Raman sont souvent développés sur la base d’un microscope optique de très haute qualité.
à提议del'échantillonnageet de lacondocalité
engénéral等人分析，aucunepréparationd'échantillonTrèsélaboréeN’estnécessairedannécessairedans la microscopie raman。习惯，leséchantillonssontplacés指导sur la table du Microscope。tout au plus，les部分thrastersles sontpréparéesoudesgrandespiècessoutceéessontcoupées - la taille pour pour s’adapter s la table。
toutefois，l'échantillonpeutgénérerune forte荧光Ou ne pas prove prove d'longueur d'Onde d'Onde d'Onde d'covitation tel tel que la microscopie raman classique peut cocassionner。
Certains échantillons nécessitent de la microscopie Raman confocal, qui offre une résolution spatiale dans les trois dimensions. De cette façon, vous pouvez mesurer à l’intérieur des contenants (p. ex. flacons de verre) ou caractériser des échantillons en 3D.
Étalonnage d’un microscope Raman
Pour des résultats précis et fiables en μ-Raman, un étalonnage précis de l’axe des longueurs d’onde est essentiel. De nombreux changements opérationnels d’un microscope Raman ont généralement des conséquences plus ou moins graves en termes d’étalonnage.
Un (re)étalonnage est effectué en mesurant un standard en Silicium, mais les microscopes modernes offrent un étalonnage continu pour une commodité maximale.
S’il n’est pas calibré en continu, le recalibrage doit être effectué régulièrement et même après des ajustements d’instruments apparemment mineurs comme des changements de laser, d’ouverture ou de réseau, des chocs et des vibrations soudains ainsi que des changements de température et des variations, afin d’assurer des données spectrales optimales.
qu'est-ce que larésolution频谱？qu'est-ce que larésolutionspatiale？
LaRésolutionSpectraledécrit le pouvoir de séparation d'un spectromètre ainsi plus la résolution spectrale est grande, plus le spectre obtenu est détaillé. Inversement si la résolution est trop faible, certains bandes spectrales disparaissent dans une large « bande ».
SilaRésolutionest Trop Grande，La Mesure Prendraégalementbeaucoup Plus de temps sans aucun aucun avantage pour pour pour l'litilisateur。il est donc重要的是deconnaîtrelarésolutionspectraleidéalepourl'échantillon。ce qui rend larésolution«trop faible»ou«tropélevée»dépendde l'application et de la t- de latâcheAnalytiqueà的成就。
La résolution spatialeEST ENIGENSE CAR ELLE影响LaFaçon不要voyons les objets。En Microscopie Raman，Il Est Essentiel de Decorder lesdifférentes结构D'unéchantillon。Parequent，加上LaRésolutionSpatialeest Grande，以及L'Information obtenue estdétaillée。
La résolution latérale et axiale est déterminée par divers paramètres. Pour obtenir la plus haute résolution dans les deux domaines, un microscope confocal Raman doit être utilisé. En règle générale, la résolution spatiale est un paramètre décisif dans l’imagerie Raman.
Qu’est-ce que la confocalité? Pourquoi est-ce si important pour Raman ?
En microscopie Optique, la confocalité signifie une illumination et une détection limités à un même volume de taille réduite passant par un pinhole. En terme pratique, au lieu de mesurer l'échantillon dans sa globalité seule une petite partie est illuminée comme une source ponctuelle. Le pinhole bloque une partie de la lumière parasite, augmentant le contraste et la profondeur de champ.
qu'est-ce que la Microscopie Concocale Raman？
Le principe peut être appliqué à la spectroscopie Raman en améliorant la résolution spatiale le long des axes latéraux (x,y) et en profondeur (z) tout en faisant des mesures de profil de profondeur. La microscopie Raman peut néanmoins différer des conceptions confocales classiques.
可节奏的概念共con
Le plus grand avantage d'un véritable microscope Raman confocal est le contrôle indépendant de la résolution spatiale et spectrale. Ceci est réalisé en plaçant un pinhole devant la fente d'entrée du spectromètre. Les différentes ouvertures de pinhole contrôlent le degré de confocalité et la fente d'entrée contrôle la résolution spectrale. Les inconvénients de cette conception est de maintenir les deux ouvertures parfaitement alignées afin de maintenir des performances optimales.
Conception pseudo-confocale
dans une构型简化，larésolutionspatialepeutêtrecontrecontreparéepar une combinaison de fented'enteéed'enthéedansune de une de delaRésolutionet delaRésolutionspatiale dudétecteurdétecteurccd dan dans une une decorder ottheporder orthogonale。les限制了光谱仪Entraînentdes cormances intere n perse derésolutionspatiale mais enréduisantle nombred'élémentsoptiques optiques dans la Configuration，le fluxd'énergied'énergieest est est est est estConsiditérablementAmélioré。
概念杂种频率（FlexFocus）
Etant donné qu'un vrai dispositif confocal offre des avantages évidents, un microscope Raman peut être équipé d'une matrice contenant un ensemble de pinhole et fente pouvant servir de fente pour la confocalité et fente d'entrée du spectromètre. Cette conception hybride combine les avantages des deux designs et permet un accès à une configuration véritablement confocale ou à une configuration fente pour des flux d'énergie élevée.
常见问题Sur La Microscopie Raman
问题frequemment姿势苏尔microscopie Raman
Quels Sont Les Avantages de la Spectroscopie Raman
La spectroscopie Raman a plusieurs avantages majeurs par rapport à d’autres techniques de spectroscopie vibrationnelle comme la spectroscopie d'absorption IR et Proche IR. Contrairement à l’absorption, l’effet Raman est la lumière inélastique que disperse un échantillon. Par conséquent, la spectroscopie Raman ne nécessite aucune ou peu de préparation d’échantillons pour mesurer les solides, les liquides et les gaz. Non seulement directement, mais aussi à travers des fenêtres transparentes telles que le verre et le plastique. L’eau a un signal Raman très faible et donc la spectroscopie Raman peut facilement détecter les composés qui se sont dissous dans l’eau sans interférence. Cela rend la spectroscopie Raman approprié pour les échantillons biologiques dans l'état natif.
梳理temps faut-il pouraccelérirun spectre spectre拉曼？
Le temps d’exposition dépend de nombreux facteurs, tels que la qualité spectrale, la puissance laser, et le parcours moyen de l'échantillon pour la diffusion Raman. En règle générale, des spectres Raman de bonne qualité peuvent être acquis en quelques secondes.
Peut-on obtenir des spectres Raman à partir d’un mélange de matériaux?
Le spectre Raman contient des informations sur toutes les molécules qui sont mesurées. Par conséquent, les spectres raman obtenus à partir de mélange contiennent des bandes de diverses molécules. Si les spectres des composants sont connus, des informations quantitatives sur la composition peuvent être obtenues.
Quelles autres informations Raman peut-on obtenir, autres que la structure chimique ?
La Spectroscopie Raman Peut Fournir，指令OU间接，各种信息telles que les iSotopes dans lesMolécules，Les allotropes，LaCristallinité，Le Polymorporiste，Le Poleymorphisme，Le Dopage Dopage Dopage Dopage Dopage dansleréseaucristallin，La Persensellin，la Persens，la Pression et la Pression等。
La Spectroscopie Raman Est-Elle定量？
L'Intensitéd'une bande dan dans un SpecterestLinéaire。La Relation entrel'Intensitémaximaleet la la浓度peutcalibrée -l'Aided'échantillonsConnus。danslesMélanges，Les Pics de Raman Fournissent des Informations定量浓度composésEnMême温度。
Quelle est la Meilleure longueur d'Onde onde laser Pour mon应用程序？
Malheureusement，La Meilleure longueur d'Onde laser pour une une应用程序Spécifiquen'est pas toujourséventente。de nombreuses变量doiventêtrecitéréespour优化者la longueur d'Onde d'Onde d'covititation dans uneexpérienceen preceptroscopie ranman。L'Efficacitédedexfusion，l'Ackation de la荧光，l'fimpicacitédudétecteur，ainsi que les performances dusystème，sont les les princionalaux方面 - prendre en clendre encassidération。La Longueur d'Onde la PlusCommunémentUtiliséeEST785 NM ET/OU 523 nm。LE 532 nm相关特色AuxMatériauxinorganiques，paremple legragene et lesfullerènes。
Quelle est la Puissance激光典型pour les Mesures拉曼？
La puissance laser à l’échantillon sur un microscope Raman est généralement de l'ordre du mW jusqu'à quelques dizaines de mW. L’intensité Raman est directement proportionnelle à la puissance laser. Cependant, il y a un risque accru de dommages sur l’échantillon lors de l’utilisation d’une puissance laser trop forte. La puissance laser peut être réduite afin d'éviter les dommages sur l'échantillon, mais ce faisant, le temps d’exposition pour acquérir des spectres de bonne qualité sera plus long.
