超分辨率显微镜

活细胞成像

粒子追踪与细胞成像结合

使用Vutara的活细胞单分子定位显微镜

生物成像需要观察细胞内的动态结构;观察细胞中的单个生物分子(粒子跟踪)或观察生物过程,如膜、细胞器或细胞骨架的运动。

Vutara VXL显微镜的功能是理想的活细胞单分子定位显微镜:

  • 3D定位使用专利的双平面技术-每幅图像有1 μ m的3D数据-不采取Z系列
  • Z系列可扩展轴向范围
  • 快速采集-高达800帧/秒全帧,高达3000帧/秒,ROI更小
  • 灵敏探测器-冷却科学CMOS相机
量子点标记EGF受体的单粒子流线。
Alexa Fluor 647®标记转移的实时成像。上图,转铁蛋白团块沿着细胞膜移动。底部是由时间加色的图像。

粒子跟踪

Vutara VXL显微镜是为单分子定位显微镜设计的,因此是颗粒跟踪实验的理想设计。Vutara的内在能力,在高速和三维成像单个荧光团,使其成为理想的粒子跟踪。样品可以用有机染料、蛋白质或量子点进行标记,并使用Vutara VXL的高速和灵敏相机进行成像。Vutara的SRX软件内置粒子跟踪算法跟踪荧光团超过多个帧。这是基于图像的超分辨率显微镜(如STED或SIM)上的单分子定位显微镜的一个强大而独特的特性。SRX软件还包括一个全面的粒子跟踪统计包分析您的数据。

在左边我们可以看到一个用量子点标记的EGF受体的扩散。

细胞成像

Vutara VXL显微镜是专为单分子定位显微镜设计的,能够在有意义的时间尺度上捕捉生物运动。这种独特的成像方式允许用户收集感兴趣结构的动态超分辨率图像,同时也为用户提供每个分子随时间变化的精确3D位置。这突出了单分子定位显微镜独特的成像方式,并使其有别于基于成像的超分辨率技术。

在右边,我们看到两个实验监测活细胞中的线粒体动力学。一幅用橙色HaloTag®染料(549)拍摄,另一幅用光激活远红外染料(PA-JF-646®)拍摄。

结合粒子跟踪和细胞成像

Vutara VXL显微镜执行多色单分子成像的能力允许一些独特的实验设计。左边是表达tomm-20::HaloTag®的细胞的两种颜色实验。在这个实验中,tomm20::HaloTag®被标记为高密度的JF549®和非常稀疏的PA-JF646®。这使得高密度染料可以被用作上下文标记,允许线粒体随着时间的推移进行重建和定位。而第二种染料可以跟踪线粒体中单个分子的扩散。使用这种技术,你可以监测细胞膜中蛋白质的扩散如何随着线粒体的运输发生变化,并经历融合或裂变。

活成像线粒体的覆盖层和单个粒子的流线跟踪扩散在线粒体中的单个tomm20蛋白。
单个tomm20蛋白的三个单独的粒子轨迹。
tomm20扩散流线叠加图及线粒体结构图像。