自底向上的蛋白质鉴定一直是生物质谱实验中最苛刻的任务之一,需要结合峰容量、速度和灵敏度,从高度复杂的消化蛋白混合物中尽可能多的多肽测序。timsTOF Pro独特的捕获离子迁移谱(TIMS)功能增加了额外的分离维度,导致前所未有的峰值容量和灵敏度,并使PASEF®(平行积累串行碎片)工作流的> 100Hz MS/MS没有灵敏度或分辨率损失,所有工作在100%占空比。
一个复杂问题
在典型的散枪蛋白质组学实验中,纳米lc通常使用2小时梯度分离超过100万个蛋白形式、浓度高达10个数量级的多肽。这对质谱仪来说是一个重大的挑战,因为质谱仪必须检测、分离和分离尽可能多的生成肽。为了获得广泛的蛋白质鉴定信息,添加离子迁移率作为额外的分离维度,有可能极大地提高峰值容量。然而,这绝不能损害速度或灵敏度。
TIMS-PASEF®
TIMS的独特设计使PASEF成为可能®该方法从离子迁移电池中洗脱浓缩的离子包,宽度为2-5 ms,使ms / ms采集速度>100 Hz,占空比接近100%。因此,额外的分离是在提高速度和灵敏度的基础上获得的,而TOF分析仪允许在所有MS和MS/MS速度下保持超高的MS/MS分辨率。
时间与PASEF Pro®导致了特殊的蛋白质鉴定性能和分析深度。当与纳米洗脱液纳米流UHPLC和CaptiveSpray离子源结合时,timsTOF Pro可以常规鉴定200 ng的HeLa细胞消化液中超过5000个蛋白组,分离梯度为90分钟。
PASEF®提高shotgun蛋白质组学的吞吐量
惊人的速度可以用来减少梯度时间和增加吞吐量,同时保持空前的分析深度。用30分钟梯度分离的100 ng Hela细胞消化液可以鉴定出近4000个蛋白质组。
TIMS分离带来的显著灵敏度提高为低浓度样品提供了新的可能性。使用标准PASEF®通过60分钟梯度分离12 ng的Hela细胞消化液,鉴定出2900多个蛋白组。
理想的临床蛋白质组学伴侣
PASEF®最终使临床蛋白质组学成为现实。该系统的速度和灵敏度结合,可重复识别超过1400个Hela细胞蛋白组,从50 ng注射用5分钟梯度分离。
仅供研究用途。不用于临床诊断程序。