超分辨率显微镜

DNA-涂料成像

单分子定位显微镜在纳米尺度形貌中的点积累

探索DNA-PAINT解决方案

用于多路复用,多色DNA涂料成像的唯一开箱解决方案

结合Bruker的软件控制,自动化,完全集成微流体单位,vutara vxl.超分辨率显微镜唯一的商业系统提供开箱即用的多路复用DNA涂料功能。对这些工具进行,DNA-涂料成像允许单分子定位显微镜中的10nm定位精度无限制多路复用潜力

此外,带有微流体系统的Vutara显微镜还具有以下额外优点:

  • No-Hassle设置与专家服务和支持,以加快数据收集时betway手机客户端下载间
  • 结果是更可靠和可重复的数据收集与改进系统
  • 自动化和多条件/多用户编程,可容易可扩展实验设计

了解更多关于dna -涂料解决方案

联系我们了解更多关于使用Vutara VXL显微镜进行DNA-PAINT实验。

DNA-PAINT是什么?

什么是DNA涂料?

DNA-涂料是一种通过用荧光团标记的短(<10个核苷酸)寡核苷酸的结合能够使单分子定位能够与靶分子结合的互补寡核苷酸,通常是抗体。它允许广泛的成像模式,从整个单元广泛的Z堆叠到高分辨率多目标图像。

了解DNA涂料成像的优势

短寡核苷酸的结合本质上是瞬态的,因此产生闪烁的效果类似于Dstorm或Palm,但DNA涂料与其他闪烁技术具有许多优点。使用用于核酸纳米结构的DNA涂料成像的优点包括:
  • 更高的光子产量:这种闪烁的持续时间通常比传统的dSTORM更长。与dSTORM和PALM等方法相比,这导致了荧光团更高的光子产量,因此允许更高的定位精度(<10 nm)。
  • 几乎不可溶解的成像:样品被浸泡在过量的荧光团中,允许极其持久的成像。
  • 无限多路复用潜力:由于靶点的特异性是由核苷酸序列决定的,因此只要有合适的工具,就可以用不同的寡核苷酸序列标记多个靶点。使用Vutara的集成微流体单元,可以从样本中清洗特定目标的成像链,并添加标记不同生物目标的不同成像链。

DNA-涂料如何工作?

DNA-涂料如何工作?

DNA-PAINT的工作原理是将一个包含荧光团的短“成像寡核苷酸”与一个互补寡核苷酸(称为“对接链”)短暂结合在目标物上,如抗体、纳米体、适配体或自杀酶配体。

使用具有DNA涂料的超分辨率显微镜

DNA-PAINT超分辨率成像包括以下几个步骤:

  1. 通过常规技术用“对接链”标记样品并准备成像。
  2. 对于成像,将样品沐浴在成像缓冲液中(通常是PBS,但可包括氧气清除剂)和与对接股线的成像寡聚物的低(通常为0.1〜1nm)的成像寡聚。成像寡核苷酸通常为9-10个核苷酸,并含有荧光团。由于其氟化性,我们推荐DNA涂料的CY3B,从而提高背景。
  3. 一旦进入成像缓冲,样品就可以成像。成像链与对接链的短暂结合阻止了荧光团的扩散,使其能够在相机上成像。

由于样本被浸泡在大量不断交换的成像链中,目标本质上是不可漂白的,这使得批量处理大量帧和扩展z堆栈成为可能。

上面的漫画展示了dna涂料是如何工作的。目的蛋白(微管蛋白)用一种用对接链寡聚物标记的抗体进行标记。然后将样本浸入成像链寡核苷酸中。荧光标记的成像链与对接链的短暂结合导致样本出现闪烁,然后可以在Vutara SRX软件中定位。这一过程不断重复,直到形成超分辨率图像。

为什么使用DNA-PAINT ?

为什么要使用DNA-PAINT进行3D细胞超分辨率成像?

BS-C-1细胞微管蛋白网络的三维细胞骨架成像。用α -微管蛋白一抗和抗兔寡聚偶联二抗标记细胞。左:3D微管蛋白网,按深度着色。右:微管蛋白聚合物的近视图,显示中空标记管腔。二级dna涂料抗体是从Massive-Photonics.com购买的

高精度定位

DNA-涂料允许SUB-10 NM定位精度,使其成为最精确的显微镜技术之一。

本文使用Vutara显微镜水浸1.2 NA物镜进行DNA-PAINT实验。该图像显示了一个完整的BS-C-1细胞的微管蛋白网络,微管蛋白抗体与DNA-PAINT二抗结合。插图显示了微管蛋白网络的放大图。微管腔清晰可见。

多色不漂立的成像

多路多色超分辨率成像可以通过DNA-PAINT实现。

由于样品在实际无限的荧光团供应中沐浴,DNA-涂料具有大型多色Z叠层的电位。这使得由数百万本地化组成的大规模Z堆叠成像。

这里,在Vutara单分子定位显微镜上进行双色DNA涂料实验。管蛋白在Magenta的青色和克拉仑标记。此外,由于DNA涂料的不可溶解性,可以是可以的DNA涂料的大Z叠层。

BS-C-1细胞中微管蛋白网络和网格蛋白笼的三维细胞骨架成像。用α -微管蛋白和抗网格蛋白重链一抗以及抗兔和抗小鼠寡聚偶联二抗标记细胞。顶部:BS-C-1细胞标记α -微管蛋白(青色)和网格蛋白笼子(洋红色)。底部:与上面相同的图像的电影显示的3D性质的数据。二级dna涂料抗体是从Massive-Photonics.com购买的
左:DNA涂料的工作流程。每个靶(肌动蛋白,汤姆20,微管蛋白和克拉肽)用初级和二抗标记。二级抗体具有正交对接股线。通过在互补成像寡核苷酸中依次对每个靶序列地进行成像,然后在所需的目标中,然后在下一个成像链中流动的洗涤步骤进行下一个靶标。使用Vutara显微镜和SRX软件自动处理流体和成像。右:来自每个目标的图像在SRX软件中自动组合。二级dna涂料抗体是从Massive-Photonics.com购买的

无限多路复用潜力

DNA-涂料具有巨大的多路复用成像潜力。

在这里,使用Vutara VXL和集成流体单元进行了多目标DNA-PAINT实验。在不同的探针上使用正交对接链,潜在的无限数量的目标是可能的。

图中还显示了在Vutara单分子定位显微镜和集成流体单元上进行的四目标DNA-PAINT实验。f -肌动蛋白洋红,tom20-青色,微管蛋白黄色和网格蛋白绿色。

样品图片

使用vutara vxl自动收集使用Fluidics的图像

样本图像:dna -涂料改进超分辨率成像

BS-C-1标记抗微管蛋白,肌动蛋白,抗tom20和抗网格蛋白。正交2ºDNA-PAINT抗体购买自Massive-Photonics.com

左上:肌动蛋白-洋红,微管蛋白-黄色,线粒体-橙色。


右上方:线粒体 - 青色,F-actin-magenta,小管蛋白黄色,克拉仑重链 - 绿色。
左下:f -肌动蛋白青色,网格蛋白笼绿色。
右下:线粒体-青色,微管蛋白-洋红。