由PASEF提供动力的timsTOF Pro

蒂姆斯托夫职业酒店

采用PASEF®技术的timsTOF Pro在扫描速度方面提供了革命性的改进,增强了特异性和高灵敏度

4D中的经济学

TIMS增加了分离的第四维度

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Основные моменты

蒂姆斯托夫

加速四维组学

速度
通过并行累积串行分段(PASEF)技术,可实现>100 Hz的测序速度。
高通量
极高的数据采集速度大大提高了生物实验的吞吐量。
深度
由于PASEF的灵敏度提高,可以识别更多的肽及其翻译后修饰(PTM)。
健壮性
独特的仪器设计,与TIMS正交反射,无需仪器清洗即可对数千个样品进行常规操作。

Особенности

由PASEF提供动力的timsTOF Pro

4D蛋白质组学的新标准™ - 更快更深入地研究蛋白质组

基于质谱(MS)的蛋白质组学已成为鉴定和定量数千种蛋白质的强大技术。然而,由于当前质谱仪的速度、灵敏度和分辨率有限,完整蛋白质组的覆盖范围仍然非常具有挑战性。

timsTOF Pro使用并行累积-串行片段化(PASEF®)采集方法提供极高的速度和灵敏度,以达到鸟枪蛋白质组学和磷酸蛋白质组学的新深度,使用较低的样本量。

由PASEF提供动力的timsTOF Pro

双TIM

捕获离子迁移率光谱法(TIMS)首先是一种气相分离技术,除了HPLC和质谱法之外,它通过增加分离维度来解决样品的复杂性,增加峰容量和化合物表征的可信度。同样重要的是,TIMS装置还可用于积累和浓缩给定质量和迁移率的离子,从而实现灵敏度和速度的独特提高以及额外的分离尺寸。

鸟枪蛋白质组学实现接近100%的占空比
双TIMS技术现在可以实现高灵敏度、高速鸟枪蛋白质组学的近100%占空比。这种新颖的设计允许离子在前部累积,而后部的离子则根据其离子迁移率依次释放。这个过程称为并行累积串行分段,或PASEF®.

并行累积-串行片段化(PASEF®)。timsTOF Pro仪器中的PASEF®策略,其中离子累积,而第二个TIMS区域连续洗脱肽物种。
由PASEF提供动力的timsTOF Pro

卓越的硬件性能

第二代双TIMS分析仪针对鸟枪蛋白质组学需求进行了优化。由于其独特的几何结构,离子的释放取决于它们从TIMS分析仪第二部分的迁移率,而更多的进入离子可以在TIMS分析仪的第一部分中平行累积。采用并行累积技术,占空比接近100%,几乎没有离子损失。

在timsTOF Pro中,先进的分段四极质量过滤器用于高离子传输和分离效率。四极质量位置与来自TIMS分析仪的特定离子的洗脱时间同步。由于其超高质量位置切换时间(<1 ms),它使PASEF具有最佳性能®方法

timsTOF Pro的示意图
由PASEF提供动力的timsTOF Pro

帕塞夫®

并行累积-串行碎片化(PASEF®)循环时间:通过使四极杆与TIMS洗脱时间同步,在100毫秒的时间范围内,平均可以碎片化12个前体。智能软件将低水平前体多次用于PASEF®ms/ms碎片化。

考虑到速度,Bruker专家重新设计了MS/MS技术,以满足鸟枪蛋白质组学的要求。使用捕获离子迁移光谱法分离肽离子,洗脱(~100 MS)并在QTOF中检测,生成TIMS-MS热图。在PASEF中®方法使用相同的TIMS分离,四极在洗脱过程中分离特定离子物种,并立即转移到下一前体。父谱和片段谱通过迁移率值对齐。使用并行累积串行分段(PASEF®)可实现技术>100 Hz的定序速度。用PASEF®方法对低丰度多肽进行多次筛选,提高其质谱质量。

帕塞夫®:非常适合鸟枪蛋白质组学
由PASEF提供动力的timsTOF Pro®提供大于100 Hz的测序速度,而不会失去灵敏度或分辨率。这是通过使四极隔离质量窗口与TIMS漏斗中特定肽包的洗脱时间同步来实现的。

Преимущества

由PASEF提供动力的timsTOF Pro

坚固耐用,无需清洗

唯一的帕塞夫®-启用质谱仪
Bruker于2016年推出了TIMS(俘获离子迁移谱)技术,作为一项革命性的离子迁移技术,在极其紧凑的设备中实现了前所未有的离子迁移率分辨率。第二代双TIMS分析仪现在支持PASEF®(并行积累-串行片段化)为鸟枪蛋白质组学的速度、灵敏度和分辨率设定了新的标准。

坚固耐用,无需清洗
许多用于鸟枪蛋白质组学的MS仪器在大样本队列上每天24小时运行时,需要每两周或每月清洗一次,并且在更短的时间段内性能会明显下降。timsTOF Pro卓越的鲁棒性意味着该仪器可以在数天或数周内全天候运行,而不会出现明显的灵敏度损失或其他性能指标。

由PASEF提供动力的timsTOF Pro

PaSER运行和完成-动态不妥协的数据处理

timsTOF Pro允许在测序速度超过100 Hz时,以最小样本负载(<200 ng)分析数百个样本。所有这些都与不妥协的蛋白质组学深度有关。这改变了蛋白质组学的工作方式,但也释放了一个新的约束——数据分析。现代研究人员必须使用timsTOF Pro处理数百个信息密集的内容样本。对于大多数管道,这会在数据分析步骤中造成瓶颈。Bruker通过引入称为PaSER(实时并行数据库搜索引擎)的实时数据库搜索功能创新了这一步骤,从而消除了数据分析的障碍。使用PaSER,一旦LC-MS运行完成,结果就在手或运行并完成。

由PASEF提供动力的timsTOF Pro

挖掘第四维度

MaxQuant/Perseus和PEAKS Studio数据处理
开放式文件数据格式允许研究人员直接处理原始数据,并使用业界领先的软件。MaxQuant已被改编为在保留时间、离子迁移率、以及,

质量和信号强度,有利于肽、蛋白质和翻译后修饰的识别和量化。PEAKS Studio将从头测序与传统数据库搜索相结合,并针对处理timsTOF原始数据进行了优化。

Применения

由PASEF提供动力的timsTOF Pro

重新定义蛋白质组学的吞吐量和敏感性

使用100 ng HeLa digest,以短梯度(30分钟、60分钟和90分钟)深度蛋白质组覆盖
转化为高蛋白质组覆盖率的速度和灵敏度
俘获离子迁移谱(TIMS)和平行积累-串联碎裂(PASEF)的联合功率®)允许更大的蛋白质组或亚蛋白质组(例如磷酸蛋白质组)覆盖率,而无需蛋白质组学中经常使用的大量样品(通常为1-4µg的肽混合物)。
从少于200 ng的样品负载中可以获得优异的结果,因此降低了样品制备成本和MS维护频率。使用90 min的梯度长度,可以从典型的人类细胞系裂解液中识别出5400多个蛋白质组。timsTOF Pro还可以从较小的样品中提供可重复的定量信息高度复杂混合物的数量。

由PASEF提供动力的timsTOF Pro

最新timsTOF Pro应用说明

prm-PASEF®:实现高通量、高灵敏度的靶向蛋白质组学
实现高通量、高灵敏度的靶向蛋白质组学®已开发了采集方法来转换并行累积串行分段(PASEF)的优点®)目标蛋白质组学领域的获取策略。

原代分泌胰岛素的胰腺β细胞的蛋白质组学研究
timsTOF Pro上集成离子迁移率与warp speed MS/MS采集的结合为深入、分子水平理解β细胞生理学和潜在的糖尿病新靶向途径铺平了道路。

高通量4D蛋白质组学™ – dia-PASEF的应用®而Evosep则适用于短梯度
timsTOF Pro提供了两种独特技术的组合,即捕获离子迁移谱(TIMS)提供的第四维,以增强离子分离和灵敏度以及并行累积-串行碎片(PASEF)®)
提高离子利用率和数据采集速度。

Вебинары

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“我们现在知道,在二维(保留时间和m/z)分析时,肽混合物仍然非常复杂。原则上,增加一个维度可以让我们走得更远。除了额外的分离维度外,timsTOF Pro为我们提供了极高的速度和灵敏度,让我们能够深入蛋白质组并使用更少的样本材料。”

Matthias Mann教授,德国马克斯·普朗克生物化学研究所蛋白质组学和信号转导系主任

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