OT-AFM组合系统配对AFM的特殊表面力测量和成像能力与光学镊子在3D中施加和测量最小力的能力。
OT-AFM组合系统配对AFM的特殊表面力测量和成像能力与光学镊子在3D中施加和测量最小力的能力。组合的设置满足了机械稳定性,灵活性和模块化的最高需求。专门设计的OT-AFM ConnectorStage™是将NanoWizard®或Cellhesion®家族的任何AFM与Nanotracker™光学镊子结合在研究级倒置光学显微镜上的关键。
OT提供的3D定位,检测和操作的独特组合以及AFM的高分辨率成像和表面特性表征打开了全新的应用范围,例如细胞响应,细胞细胞或细胞基质相互作用,免疫反应,感染或细菌/病毒/纳米颗粒摄取过程等。
OT-AFM具有多种可用的手柄,交互和检测位点,可显着扩展单分子应用的范围。
1. DNA发夹解压缩(AFM),而光学陷阱可用于抑制(高激光功率)或量化旋转(低激光功率)。
2. Scanning of a decorated DNA molecule. The molecule with DNA binding proteins (green) is spanned between two optically trapped beads. A functionalized AFM tip (blue) scans along the molecule and whenever interactions between the DNA-attached proteins and the tip occur, these can be detected in the AFM and OT signals.
3.监测DNA-酶(例如聚合酶,解旋酶)动力学。随着Onestrand连接到光学捕获的粒子,可以跟踪逐步运动。闭环力夹具允许在单链上保持恒定力。
细胞反应,细胞 - 细胞或细胞基质相互作用,免疫反应,感染或细菌/病毒/纳米颗粒摄取过程只是可以使用JPK新的ART-AFM平台进行研究的一些示例。JPK经过证明的AFM和OT核心技术,结合荧光显微镜,为实时细胞应用树立了最终基准。
[1] + [2]:具有功能化珠的细胞激活,平行AFM测量。在微粒表面上的信号分子与定义位置和时间点处的单元接触。
[5] + [6]:一个机械敏感的细胞由光学捕获粒子施加的周期力刺激。细胞骨架的内部重排改变了细胞的机械性能。这些属性很容易通过AFM方法访问,例如力量映射或JPK的定量成像高级(QI™-Adadanced)。
[3] + [4]: AFM can be used in parallel to monitor changes in the cell structure, e.g. by monitoring mechanical properties throughout the process or by molecular recognition force spectroscopy that investigates the distribution and mechanical behavior of membrane proteins.
通过使用官能化颗粒或改良的微生物触发细胞反应是一种常见方法。可以使用基于AFM的方法研究细胞结构,动力学和机械性能的结果变化。但是,将物体传递到细胞上的特定感兴趣区域非常困难。OT提供了在精确的时间和位置操纵样品并触发蜂窝响应的理想工具。这显着提高了这些研究的吞吐量,灵活性和可重复性。在此应用中,树突状细胞(DC)和调节性T细胞之间信号的影响(tReg)关于常规T细胞的粘附(t转换)到同一DC通过OT-AFM量化。
[1]对树突状细胞(DC)和常规T细胞的粘附实验(T转换)。t转换一世s attached to a tipless cantilever, then approached to the surface-bound DC. The cantilever is pulled up and the adhesion forces are measured. A regulatory T-cell (TReg)通过光学镊子连接到直流并从DC上取出,以测试其对结合强度的影响。[2]+[3]测量设置。光学陷阱(红十字)移动TRegwhile adhesion measurements are performed with a cantilever-attached T转换。[4]针对三种情况测量的分离工作。Treg附件减少了DC-T转换互动。t之后Reg去除,几乎恢复了粘附水平。样本由北京卡尔加里大学/Tsinghua大学Yan Shi提供。原始实验是由Yan Shi等人设计的。(印刷中的出版物)。
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